Dal monomero AEEA al dimero

Il rapporto farmaco-anticorpo (DAR) è un attributo chiave di qualità dei farmaci coniugati con anticorpi (ADC) che influisce direttamente sull'efficacia e sulla tossicità. Il DAR ideale è solitamente 2-4, ma molti carichi utili efficienti come MMAE e DM1 hanno una forte idrofobicità. Quando si utilizzano linker a catena corta o singoli PEG, DAR superiori a 4 portano ad un'aggregazione e alla clearance accelerate dell'anticorpo. L'introduzione dell'AEEA-AEEA fornisce una soluzione efficace a questo problema.
Rispetto ad un singolo linker AEEA,AEEA-AEEAraddoppia la lunghezza della catena PEG e ha una maggiore idrofilicità. Ciascuna unità dimerica contribuisce con 4 legami eterei e 2 legami ammidici, che possono legare più molecole d'acqua e formare uno strato di idratazione più denso. Quando più farmaci idrofobici sono collegati alla superficie dell'anticorpo tramite AEEA-AEEA, lo strato di idratazione può proteggere efficacemente le interazioni idrofobiche tra i farmaci e prevenire l'aggregazione degli anticorpi. I dati sperimentali mostrano che gli ADC costruiti utilizzando AEEA-AEEA mantengono la stabilità colloidale (tasso di aggregazione<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
La strategia di regolamentazione DAR si riferisce al pre-collegamento di AEEA-AEEA a un farmaco con tecnologia di accoppiamento sito diretto e alla successiva reazione con cisteina ingegnerizzata sull'anticorpo. Regolando il rapporto molare tra farmaco linker e anticorpo (solitamente da 3:1 a 10:1), il valore DAR può essere controllato con precisione. Ad esempio, un eccesso di 2-volte può dare un prodotto DAR2, un eccesso di 4-volte può dare un prodotto DAR4 e un eccesso di 8 volte può dare un prodotto DAR6-8. L'HIC-HPLC o la spettrometria di massa possono determinare con precisione la distribuzione del DAR. Per le indicazioni tumorali che richiedono un carico elevato, come il cancro al seno con bassa espressione di HER2 e il cancro del polmone a piccole cellule, AEEA-AEEA rende possibile un DAR elevato e migliora significativamente l'effetto di uccisione del tumore. Studi preclinici hanno dimostrato che l’ADC del DAR6 aumenta il tasso di inibizione del tumore di circa il 40% rispetto all’ADC del DAR4 alla stessa dose, senza aumentare significativamente la tossicità.